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Le sommaire
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I) Manipuler les gènes, les protéines et les cellules
II) Biologie cellulaire et physiologie étudiée
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Résumé du document
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Répresseurs : l'ADN interférence pour inhiber l'expression d'un gène.

- Facteur de transcription se fixe sur le promoteur et inhibe ou déclenche l'expression des gènes.
- Complexe protéique RISC rend silencieux un ARNm ()

Extraits

[...] Pour étudier l'expression d'une protéine dans une cellule on utilise un anticorps spécifique dirigé contre la protéine. (taille = poids moléculaire). Technique SDS-PAGE Séparation des protéines par électrophorèse sur gel de polyacrylamide après traitement au sodium dodécyl sulfate. On s'assure que les protéines ont la même charge. Cette technique confère une charge à la surface des protéines. Dénaturation légère des protéines. Le β-mercato éthanol réduit les protéines (ponts disulfures). On les applique sur un gel de polyacrylamide : on met les protéines dans un puits. [...]


[...] obtention d'une lignée cellulaire fabriquant des anticorps monoclonaux spécifiques. Anticoprs polyclonal : mélange de plusieurs anticorps monoclonaux non séparés par une technique d'hybridome. Etudier l'expression des gènes Rappels. Exon = partie codante / Intron = partie non codante. introns pour 7 exons). Protection par côté et assure la protection des extrémités de l'ARNm. Mesurer l'expression des gènes mesurer la quantité d'ARNm (instable contrairement à l'ADN). La RT-PCR quantitative : La transcription inverse (RT). Amplification par PCR de l'ADNc. Quantification relative par SYBR-Green = molécule qui s'intercale entre 2 molécules d'ADN et devient fluorescente. [...]


[...] Culture cellulaire : si cellule vivante in vitro. Mesurer la structure et l'activité (enzyme) ainsi que les partenaires de la protéine in vitro biochimie. Déterminer la localisation subcellulaire de la protéine sauvage et mutée microscopie, anticorps, protéines de fusion, cytométrie de flux. Comprendre le rôle physiologique de cette protéine in vivo modèles animaux. Les animaux génétiquement modifiés La transgenèse = 1ère technique développée pour la surexpression d'un gène chez tous les animaux. On prend un ovule fécondé au stade 2 protonucléi (les 2 noyaux n'ont pas encore fusionné), on microinjecte des fragments d'ADN linéaires plasmides) sur lesquels on trouve un promoteur, puis on microinjecte l'ADNc du gène que l'on veut étudier. [...]

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Informations sur le doc

Date de publication
15/07/2010
Langue
français
Format
Word
Type
cours
Nombre de pages
16 pages
Niveau
grand public
Consulté
1 fois

Informations sur l'auteur Claire J. (étudiant)

Niveau
Grand public
Etude suivie
médecine
Ecole, université
Nantes
Note du document :
         
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